Kit de detecció d'anticossos neutralitzants SARS-CoV-2 (ELISA)
【ÚS PREVIST】
El kit de detecció d'anticossos neutralitzants SARS-CoV-2 és un assaig immunoabsorbent lligat a enzims competitiu (ELISA) destinat a la detecció qualitativa i semicuantitativa d'anticossos neutralitzants totals del SARS-CoV-2 en sèrum i plasma humà. El kit de detecció d'anticossos neutralitzants SARS-CoV-2 es pot utilitzar com a ajuda per identificar individus amb una resposta immune adaptativa al SARS-CoV-2, que indica una infecció recent o prèvia. El kit de detecció d'anticossos neutralitzants SARS-CoV-2 no s'ha d'utilitzar per diagnosticar la infecció aguda per SARS-CoV-2.
【INTRODUCCIÓ】
Les infeccions per coronavirus solen induir respostes d'anticossos neutralitzants. Les taxes de seroconversió en pacients amb COVID-19 són del 50% i del 100% els dies 7 i 14 després de l'aparició dels símptomes, respectivament. Per presentar els coneixements, l'anticòs neutralitzador de virus corresponent a la sang és reconegut com un objectiu per determinar l'eficàcia d'anticossos i una concentració més alta d'anticossos neutralitzant indica una major eficàcia de protecció. La prova de neutralització de reducció de plaques (PRNT) s'ha reconegut com l'estàndard d'or per detectar anticossos neutralitzants. No obstant això, a causa del seu baix rendiment i major requisit de funcionament, PRNT no és pràctic per al serodiagnòstic a gran escala i l'avaluació de vacunes. El kit de detecció d'anticossos neutralitzants SARS-CoV-2 es basa en la metodologia ELISA (Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), que pot detectar l'anticossos neutralitzant a la mostra de sang i accedir especialment als nivells de concentració d'aquest tipus d'anticossos.
【Procediment de prova】
1.En tubs separats, una alícuota de 120 μL de la solució hACE2-HRP preparada.
2.Afegiu 6 μL de calibradors, mostres desconegudes, controls de qualitat a cada tub i barregeu bé.
3. Transferiu 100 μL de cada mescla preparada al pas 2 als pous de microplaques corresponents segons la configuració de prova predissenyada.
3.Cobriu la placa amb Plate Sealer i s'incuba a 37 °C durant 60 minuts.
4. Traieu el segellador de plaques i renteu-la amb aproximadament 300 μL de solució de rentat 1× per pou quatre vegades.
5. Toqueu la placa sobre una tovallola de paper per eliminar el líquid residual dels pous després dels passos de rentat.
6.Afegiu 100 μL de solució de TMB a cada pou i incubeu la placa a la foscor a 20 – 25 °C durant 20 minuts.
7.Afegiu 50 μL de Solució Stop a cada pou per aturar la reacció.
8.Llegiu l'absorbància del lector de microplaques a 450 nm en 10 minuts (es recomana 630 nm com a accessori per obtenir un rendiment de major precisió.
