Komplet za detekciju neutralizirajućih antitijela SARS-CoV-2 (ELISA)
【NAMENJENA UPOTREBA】
SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit je kompetitivni enzimski imunosorbentni test (ELISA) namijenjen kvalitativnom i polu-kvantitativnom otkrivanju ukupnih neutralizirajućih antitijela na SARS-CoV-2 u ljudskom serumu i plazmi. Komplet za otkrivanje neutralizirajućih antitijela SARS-CoV-2 može se koristiti kao pomoć u identifikaciji pojedinaca s adaptivnim imunološkim odgovorom na SARS-CoV-2, što ukazuje na nedavnu ili prethodnu infekciju. Komplet za otkrivanje neutralizirajućih antitijela SARS-CoV-2 ne bi se trebao koristiti za dijagnosticiranje akutne infekcije SARS-CoV-2.
【UVOD】
Infekcije koronavirusom obično izazivaju reakcije neutralizirajućih antitijela. Stope serokonverzije kod pacijenata sa COVID-19 su 50% i 100% 7. odnosno 14. dana nakon pojave simptoma. Prema sadašnjem saznanju, odgovarajuće antitijelo neutralizirajuće na virus u krvi je prepoznato kao cilj za određivanje djelotvornosti antitijela, a veća koncentracija neutralizirajućeg antitijela ukazuje na veću efikasnost zaštite. Test neutralizacije smanjenja plaka (PRNT) je prepoznat kao zlatni standard za otkrivanje neutralizirajućih antitijela. Međutim, zbog svoje niske propusnosti i većeg zahtjeva za operacijom, PRNT nije praktičan za serodijagnostiku velikih razmjera i evaluaciju vakcine. Komplet za detekciju neutralizirajućih antitijela SARS-CoV-2 baziran je na metodologiji kompetitivnog enzimskog imunosorbentnog testa (ELISA), koji može otkriti neutralizirajuće antitijelo u uzorku krvi, kao i posebno pristupiti razinama koncentracije ove vrste antitijela.
【Procedura testiranja】
1. U odvojenim epruvetama, alikvot od 120 μL pripremljenog rastvora hACE2-HRP.
2. Dodajte 6 μL kalibratora, nepoznatih uzoraka, kontrole kvaliteta u svaku epruvetu i dobro promiješajte.
3. Prenesite 100 μL svake mješavine pripremljene u koraku 2 u odgovarajuće jažice mikroploče prema unaprijed dizajniranoj test konfiguraciji.
3. Pokrijte ploču sa Plate Sealer-om i inkubirajte na 37°C 60 minuta.
4.Uklonite zaptivač za ploče i operite ploču sa približno 300 μL 1× rastvora za pranje po otvoru četiri puta.
5. Kucnite ploču o papirni ubrus kako biste uklonili ostatke tekućine u jamicama nakon koraka pranja.
6. Dodajte 100 μL rastvora TMB u svaku jažicu i inkubirajte ploču u mraku na 20 – 25°C 20 minuta.
7. Dodajte 50 μL Stop rastvora u svaku jažicu da zaustavite reakciju.
8. Očitajte apsorbanciju u čitaču mikropločica na 450 nm u roku od 10 minuta (630 nm kao dodatak se preporučuje za veću preciznost.
