SARS-COV-2 নিরপেক্ষ অ্যান্টিবডি সনাক্তকরণ কিট (ELISA)
【নীতি】
SARS-COV-2 নিরপেক্ষ অ্যান্টিবডি সনাক্তকরণ কিটটি প্রতিযোগিতামূলক ELISA পদ্ধতির উপর ভিত্তি করে।
পরিশোধিত রিসেপ্টর বাইন্ডিং ডোমেন (আরবিডি), ভাইরাল স্পাইক (গুলি) প্রোটিন এবং হোস্ট সেল থেকে প্রোটিন ব্যবহার করে
রিসেপ্টর ACE2, এই পরীক্ষাটি ভাইরাস-হোস্ট নিরপেক্ষ ইন্টারঅ্যাকশনকে নকল করার জন্য ডিজাইন করা হয়েছে।
ক্যালিব্রেটার, মান নিয়ন্ত্রণ এবং সিরাম বা প্লাজমা নমুনাগুলি পৃথকভাবে মিশ্রণে ভালভাবে মিশ্রিত হয়
HACE2-HRP কনজুগেটযুক্ত বাফার ছোট টিউবগুলিতে অ্যালিকোটেটযুক্ত। তারপরে মিশ্রণগুলি স্থানান্তরিত হয়
মাইক্রোপ্লেট কূপগুলি স্থির রিকম্বিন্যান্ট সারস-কোভ -২ আরবিডি খণ্ড (আরবিডি) সমন্বিত
ইনকিউবেশন 30 মিনিটের ইনকিউবেশন চলাকালীন, ক্যালিব্রেটারগুলিতে আরবিডি নির্দিষ্ট অ্যান্টিবডি, কিউসি এবং
নমুনাগুলি কূপগুলিতে স্থির করা আরবিডি নির্দিষ্ট বাঁধাইয়ের জন্য HACE2-HRP এর সাথে প্রতিযোগিতা করবে। পরে
ইনকিউবেশন, কূপগুলি আনবাউন্ড HACE2-HRP কনজুগেট অপসারণ করতে 4 বার ধুয়ে নেওয়া হয়। একটি সমাধান
এরপরে টিএমবি যুক্ত করা হয় এবং ঘরের তাপমাত্রায় 20 মিনিটের জন্য সঞ্চারিত হয়, যার ফলে ক এর বিকাশ ঘটে
নীল রঙ 1 এন এইচসিএল সংযোজন দিয়ে রঙ বিকাশ বন্ধ করা হয় এবং শোষণটি হয়
450 এনএম এ স্পেকট্রোফোটোমেট্রিকভাবে পরিমাপ করা হয়েছে। গঠিত রঙের তীব্রতা সমানুপাতিক
এনজাইমের পরিমাণ উপস্থিত রয়েছে এবং একইভাবে অনুমান করা মানের পরিমাণের সাথে বিপরীতভাবে সম্পর্কিত।
প্রদত্ত ক্যালিব্রেটার দ্বারা গঠিত ক্রমাঙ্কন বক্ররেখার সাথে তুলনা করার মাধ্যমে, ঘনত্ব
অজানা নমুনায় অ্যান্টিবডিগুলি নিরপেক্ষ করা গণনা করা হয়।
【উপকরণ প্রয়োজনীয় কিন্তু সরবরাহ করা হয় না】
1। পাতিত বা ডিওনাইজড জল
2। যথার্থ পাইপেটস: 10μl, 100μl, 200μl এবং 1 এমএল
3 ... ডিসপোজেবল পাইপেট টিপস
4। মাইক্রোপ্লেট রিডার 450nm এ শোষণ পড়তে সক্ষম।
5। শোষণকারী কাগজ
6। গ্রাফ পেপার
7। ঘূর্ণি মিশ্রণ বা সমতুল্য
【নমুনা সংগ্রহ এবং স্টোরেজ】
1। কে 2-ইডিটিএযুক্ত টিউবগুলিতে সংগৃহীত সিরাম এবং প্লাজমা নমুনাগুলি এই কিটের জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে।
2। নমুনাগুলি ক্যাপড করা উচিত এবং 2 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেড - 8 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডে 48 ঘন্টা পর্যন্ত সংরক্ষণ করা যেতে পারে।
দীর্ঘ সময়ের জন্য অনুষ্ঠিত নমুনাগুলি (months মাস পর্যন্ত) অ্যাসের আগে -20 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডে একবার হিমায়িত করা উচিত।
বারবার ফ্রিজ-গলিত চক্র এড়িয়ে চলুন।
প্রোটোকল
【রিএজেন্ট প্রস্তুতি】
1। সমস্ত রিএজেন্টগুলি অবশ্যই রেফ্রিজারেশন থেকে বাইরে নিয়ে যেতে হবে এবং ব্যবহারের আগে ঘরের তাপমাত্রায় ফিরে আসতে দেওয়া উচিত
(20 ° থেকে 25 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেড)। ব্যবহারের পরে তাত্ক্ষণিকভাবে রেফ্রিজারেটরে সমস্ত রিএজেন্টগুলি সংরক্ষণ করুন।
2। সমস্ত নমুনা এবং নিয়ন্ত্রণগুলি ব্যবহারের আগে ঘূর্ণিত হওয়া উচিত।
3। HACE2-HRP সমাধান প্রস্তুতি: পাতলা HACE2-HRP ঘনত্ব 1: 51 মিশ্রণ অনুপাতের সাথে কনসেন্ট্রেট
বাফার উদাহরণস্বরূপ, এইচআরপি ডিলিউশন বাফার থেকে 5.0 মিলি সহ HACE2-HRP এর 100 μL মিশ্রিত করুন
একটি HACE2-HRP সমাধান করুন।
4। 1 × ওয়াশ সলিউশন প্রস্তুতি: ডিওনাইজড বা পাতিত জল দিয়ে 20 × ওয়াশ সলিউশনটি মিশ্রিত করুন a
1:19 এর ভলিউম অনুপাত। উদাহরণস্বরূপ, 380 মিলি ডিওনাইজড বা দিয়ে 20 এমএল 20 মিলি ওয়াশ সলিউশন পাতলা করুন
1 × ওয়াশ দ্রবণ 400 মিলি তৈরি করতে পাতিত জল।
【পরীক্ষা পদ্ধতি】
1। পৃথক টিউবগুলিতে, প্রস্তুত HACE2-HRP দ্রবণটির অ্যালিকোট 120μL।
2। ক্যালিব্রেটারগুলির 6 μL যোগ করুন, অজানা নমুনা, প্রতিটি টিউবে মান নিয়ন্ত্রণ করুন এবং ভালভাবে মিশ্রিত করুন।
3। পদক্ষেপ 2 এ প্রস্তুত প্রতিটি মিশ্রণের 100μl স্থানান্তর করুন সংশ্লিষ্ট মাইক্রোপ্লেট কূপ অনুসারে
পূর্বনির্ধারিত পরীক্ষা কনফিগারেশন করতে।
3। প্লেট সিলার দিয়ে প্লেটটি Cover েকে রাখুন এবং 30 মিনিটের জন্য 37 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডে ইনকিউবেট করুন।
4। প্লেট সিলারটি সরান এবং চারবার ভাল প্রতি 1 × ওয়াশ সলিউশনের প্রায় 300 μl দিয়ে প্লেটটি ধুয়ে ফেলুন।
5। ধুয়ে ধোয়া পরে কূপগুলিতে অবশিষ্ট তরল অপসারণ করতে কাগজের তোয়ালে প্লেটটি আলতো চাপুন।
।
7। প্রতিক্রিয়া বন্ধ করতে প্রতিটি কূপের 50 μL স্টপ সলিউশন যুক্ত করুন।
8 .. 10 মিনিটের মধ্যে 450 এনএম এ মাইক্রোপ্লেট রিডারে শোষণটি পড়ুন (আনুষঙ্গিক হিসাবে 630nm হিসাবে
উচ্চতর নির্ভুলতার পারফরম্যান্সের জন্য প্রস্তাবিত)।