Комплект за откриване на неутрализиращи антитела на SARS-CoV-2 (ELISA)
【ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ】
Комплектът за откриване на неутрализиращи антитела на SARS-CoV-2 е конкурентен ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA), предназначен за качествено и полуколичествено откриване на общи неутрализиращи антитела срещу SARS-CoV-2 в човешки серум и плазма. Комплектът за откриване на неутрализиращи антитела на SARS-CoV-2 може да се използва като помощно средство при идентифициране на индивиди с адаптивен имунен отговор към SARS-CoV-2, което показва скорошна или предишна инфекция. Комплектът за откриване на неутрализиращи антитела на SARS-CoV-2 не трябва да се използва за диагностициране на остра инфекция на SARS-CoV-2.
【ВЪВЕДЕНИЕ】
Коронавирусните инфекции обикновено предизвикват реакции на неутрализиращи антитела. Степента на сероконверсия при пациенти с COVID-19 е съответно 50% и 100% на 7 и 14 ден след появата на симптомите. За представяне на знания, съответното антитяло за неутрализиране на вируса в кръвта е разпознато като мишена за определяне на ефикасността на антитялото и по-високата концентрация на неутрализиращото антитяло показва по-висока ефикасност на защитата. Тестът за неутрализиране на намаляване на плаката (PRNT) е признат за златен стандарт за откриване на неутрализиращи антитела. Въпреки това, поради ниската си производителност и по-високите изисквания за работа, PRNT не е практичен за широкомащабна серодиагностика и оценка на ваксина. Комплектът за откриване на неутрализиращи антитела на SARS-CoV-2 се основава на методологията на конкурентен ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA), който може да открие неутрализиращите антитела в кръвна проба, както и да получи специален достъп до нивата на концентрация на този тип антитела.
【Процедура за изпитване】
1. В отделни епруветки, аликвотирайте 120 μL от приготвения разтвор на hACE2-HRP.
2. Добавете 6 μL калибратори, неизвестни проби, контроли за качество във всяка епруветка и разбъркайте добре.
3. Прехвърлете 100 μL от всяка смес, приготвена в стъпка 2, в съответните ямки на микроплака според предварително проектираната тестова конфигурация.
3. Покрийте плочата с уплътнител за плочи и инкубирайте при 37°C за 60 минути.
4. Отстранете уплътнителя на плочата и измийте плочата с приблизително 300 μL от 1 × разтвор за промиване на ямка четири пъти.
5. Потупайте плаката върху хартиена кърпа, за да отстраните остатъчната течност в ямките след стъпките на измиване.
6. Добавете 100 μL разтвор на TMB към всяка ямка и инкубирайте плаката на тъмно при 20 – 25°C за 20 минути.
7. Добавете 50 μL стоп разтвор към всяка ямка, за да спрете реакцията.
8. Отчетете абсорбцията в четец на микроплаки при 450 nm в рамките на 10 минути (630 nm като аксесоар се препоръчва за по-висока прецизност).
