Набор для выяўлення нейтралізуючых антыцелаў да SARS-CoV-2 (ELISA)

Кароткае апісанне:


Дэталь прадукту

Тэгі прадукту

ПРЫНЦЫП

Набор для выяўлення нейтралізуючых антыцелаў SARS-CoV-2 заснаваны на канкурэнтнай метадалогіі ELISA.

Выкарыстанне вычышчанага дамена звязвання з рэцэптарам (RBD), бялку з віруснага шыпа (S) і клеткі-гаспадара

рэцэптара ACE2, гэты тэст прызначаны для імітацыі нейтралізуючага ўзаемадзеяння віруса і гаспадара.

Калібратары, сродкі кантролю якасці і ўзоры сыроваткі або плазмы індывідуальна добра змешваюцца ў развядзенні

буфер, які змяшчае кан'югат hACE2-HRP, разбіты ў невялікія прабіркі. Затым сумесі перакладаюцца

лункі мікрапланшата, якія змяшчаюць імабілізаваны рэкамбінантны фрагмент RBD SARS-CoV-2 (RBD) для

інкубацыйны. Падчас 30-хвіліннай інкубацыі RBD-спецыфічныя антыцелы ў калібратарах, КК і

ўзоры будуць канкурыраваць з hACE2-HRP за спецыфічнае звязванне RBD, імабілізаванага ў лунках. Пасля

інкубацыі лункі прамываюць 4 разы для выдалення незвязанага кан'югата hACE2-HRP. Рашэнне

Затым дадаюць TMB і інкубуюць 20 хвілін пры пакаёвай тэмпературы, што прыводзіць да развіцця a

блакітны колер. Развіццё колеру спыняецца з даданнем 1N HCl, і паглынанне

вымяраецца спектрафатаметрычна пры 450 нм. Інтэнсіўнасць фарміруецца прапарцыйная

колькасць прысутнага фермента і знаходзіцца ў зваротнай залежнасці ад колькасці стандартаў, якія аналізуюцца такім жа чынам.

Праз параўнанне з калібравальнай крывой, сфарміраванай забяспечанымі калібратарамі, канцэнтрацыя

затым вылічаюцца нейтралізуючыя антыцелы ў невядомым узоры.

1
2

МАТЭРЫЯЛЫ, ПАТРЭБНЫЯ, АЛЕ НЕ ПАСТАЎЛЯЮЦЦА

1. Дыстыляваная або дэіянізаваная вада

2. Дакладныя піпеткі: 10 мкл, 100 мкл, 200 мкл і 1 мл

3. Аднаразовыя наканечнікі для піпетак

4. Счытвальнік мікрапланшэтаў, здольны счытваць паглынанне пры 450 нм.

5. Паглынальная папера

6. Міліметровая папера

7. Віхравы міксер або аналагічны

ЗБОР І ЗАХОЎВАННЕ Ўзораў

1. Для гэтага набору можна выкарыстоўваць узоры сыроваткі і плазмы, сабраныя ў прабіркі, якія змяшчаюць K2-EDTA.

2. Узоры павінны быць зачынены вечкам і могуць захоўвацца да 48 гадзін пры 2 °C - 8 °C перад аналізам.

Узоры, якія захоўваюцца на працягу больш доўгага часу (да 6 месяцаў), павінны быць замарожаны толькі адзін раз пры -20 °C перад аналізам.

Пазбягайце паўторных цыклаў замарожвання-адтавання.

ПРАТАКОЛ

3

Падрыхтоўка рэагентаў

1. Перад выкарыстаннем усе рэагенты трэба дастаць з халадзільніка і даць ім вярнуцца да пакаёвай тэмпературы

(ад 20° да 25°C). Захоўвайце ўсе рэагенты ў халадзільніку адразу пасля выкарыстання.

2. Усе ўзоры і кантрольныя пробы перад выкарыстаннем неабходна змяшаць.

3. Падрыхтоўка раствора hACE2-HRP: развядзіце канцэнтрат hACE2-HRP у суадносінах развядзення 1: 51 з дапамогай развядзення.

Буфер. Напрыклад, развядзіце 100 мкл канцэнтрату hACE2-HRP 5,0 мл буфера для развядзення HRP, каб

зрабіць раствор hACE2-HRP.

4. Падрыхтоўка 1 × раствора для прамывання: развядзіце 20 × раствор для прамывання дэіянізаванай або дыстыляванай вадой з дапамогай

аб'ёмныя суадносіны 1:19. Напрыклад, развядзіце 20 мл раствора для прамывання 20 × 380 мл дэіянізаванай або

дыстыляванай вады, каб зрабіць 400 мл 1 × раствора для прамывання.

Працэдура выпрабаванняў

1. У асобныя прабіркі разбярыце 120 мкл прыгатаванага раствора hACE2-HRP.

2. Дадайце 6 мкл калібратараў, невядомых узораў, кантроляў якасці ў кожную прабірку і добра змяшайце.

3. Перанясіце 100 мкл кожнай сумесі, прыгатаванай на этапе 2, у адпаведныя лункі мікрапланшэтаў у адпаведнасці з

да загадзя распрацаванай тэставай канфігурацыі.

3. Накрыйце пласціну Plate Sealer і інкубуйце пры 37°C на працягу 30 хвілін.

4. Зніміце герметык для пласціны і прамыйце пласціну прыблізна 300 мкл 1 × раствора для прамывання на лунку чатыры разы.

5. Пастукайце пласцінай па папяровым ручнік, каб выдаліць рэшткі вадкасці ў лунках пасля этапаў прамывання.

6. Дадайце 100 мкл раствора TMB у кожную лунку і інкубуйце пласціну ў цемры пры 20 - 25°C на працягу 20 хвілін.

7. Дадайце 50 мкл стоп-раствора ў кожную лунку, каб спыніць рэакцыю.

8. Прачытайце абсорбцыю ў счытвальніку мікрапланшэтаў пры 450 нм на працягу 10 хвілін (630 нм у якасці дадатку).

рэкамендуецца для больш высокай прадукцыйнасці дакладнасці).

Адпраўце нам паведамленне:

Адпраўце нам паведамленне:

Напішыце тут сваё паведамленне і адпраўце яго нам