Набор для выяўлення нейтралізуючых антыцелаў да SARS-CoV-2 (ІФА)
【ВЫКАРЫСТАННЕ па прызначэнні】
Набор для выяўлення нейтралізуючых антыцелаў SARS-CoV-2 — гэта канкурэнтны імунаферментны аналіз (ІФА), прызначаны для якаснага і паўколькаснага выяўлення агульных нейтралізуючых антыцелаў да SARS-CoV-2 у сыроватцы і плазме крыві чалавека. Набор для выяўлення нейтралізуючых антыцелаў да SARS-CoV-2 можна выкарыстоўваць у якасці дапаможніка для ідэнтыфікацыі асоб з адаптыўным імунным адказам на SARS-CoV-2, што паказвае на нядаўнюю або папярэднюю інфекцыю. Набор для выяўлення нейтралізуючых антыцелаў SARS-CoV-2 нельга выкарыстоўваць для дыягностыкі вострай інфекцыі SARS-CoV-2.
【УВОДЗІНЫ】
Каранавірусныя інфекцыі звычайна выклікаюць рэакцыю нейтралізуючых антыцелаў. Паказчыкі сераканверсіі ў пацыентаў з COVID-19 складаюць 50% і 100% на 7 і 14 дзень пасля з'яўлення сімптомаў адпаведна. Згодна з дадзенымі, адпаведныя нейтралізуючыя вірус антыцелы ў крыві з'яўляюцца мішэнню для вызначэння эфектыўнасці антыцелаў, а больш высокая канцэнтрацыя нейтралізуючых антыцелаў паказвае на больш высокую эфектыўнасць абароны. Тэст нейтралізацыі памяншэння налёту (PRNT) быў прызнаны залатым стандартам для выяўлення нейтралізуючых антыцелаў. Аднак з-за нізкай прапускной здольнасці і больш высокіх патрабаванняў да працы PRNT непрыдатны для шырокамаштабнай серадыягностыкі і ацэнкі вакцын. Набор для выяўлення нейтралізуючых антыцелаў да SARS-CoV-2 заснаваны на метадалогіі канкурэнтнага імунаферментнага аналізу (ELISA), які можа выяўляць нейтралізуючыя антыцелы ў пробе крыві, а таксама спецыяльны доступ да ўзроўню канцэнтрацыі гэтага тыпу антыцелаў.
【Працэдура выпрабаванняў】
1. У асобныя прабіркі разбярыце 120 мкл прыгатаванага раствора hACE2-HRP.
2. Дадайце 6 мкл калібратараў, невядомых узораў, кантроляў якасці ў кожную прабірку і добра змяшайце.
3. Перанясіце 100 мкл кожнай сумесі, прыгатаванай на этапе 2, у адпаведныя лункі мікрапланшата ў адпаведнасці з загадзя распрацаванай тэставай канфігурацыяй.
3. Накрыйце пласціну Plate Sealer і інкубуйце пры 37°C на працягу 60 хвілін.
4. Зніміце герметык для пласцін і прамыйце пласціну прыкладна 300 мкл 1 × раствора для прамывання на лунку чатыры разы.
5. Пастукайце талеркай па папяровым ручнік, каб выдаліць рэшткі вадкасці ў лунках пасля этапаў прамывання.
6. Дадайце 100 мкл раствора ТМБ у кожную лунку і інкубуйце пласціну ў цемры пры 20-25°C на працягу 20 хвілін.
7. Дадайце 50 мкл стоп-раствора ў кожную лунку, каб спыніць рэакцыю.
8. Прачытайце паглынанне ў счытвальніку мікрапланшэтаў пры 450 нм на працягу 10 хвілін (630 нм у якасці дадатку рэкамендуецца для больш высокай дакладнасці.
