SARS-CoV-2 Neytrallaşdırıcı Anticisim Aşkarlama Kiti (ELISA)
【MƏQSƏDİ İSTİFADƏ】
SARS-CoV-2 zərərsizləşdirici anticisim aşkarlama dəsti insan zərdabında və plazmasında SARS-CoV-2-yə qarşı ümumi neytrallaşdırıcı anticisimlərin keyfiyyət və yarı kəmiyyətcə aşkarlanması üçün nəzərdə tutulmuş Rəqabətli Fermentlə Əlaqəli İmmunosorbent Təhlilidir (ELISA). SARS-CoV-2 Neytrallaşdırıcı Anticisim Aşkarlama Kiti SARS-CoV-2-yə adaptiv immun cavabı olan şəxslərin müəyyən edilməsində yardım kimi istifadə oluna bilər, bu da son və ya əvvəlki infeksiyanı göstərir. SARS-CoV-2 Neytrallaşdırıcı Anticisim aşkarlama dəsti kəskin SARS-CoV-2 infeksiyasının diaqnozu üçün istifadə edilməməlidir.
【GİRİŞ】
Koronavirus infeksiyaları adətən neytrallaşdırıcı antikor reaksiyalarına səbəb olur. COVID-19 xəstələrində serokonversiya nisbətləri simptomların başlanmasından 7 və 14-cü gündə müvafiq olaraq 50% və 100% təşkil edir. Biliyi təqdim etmək üçün, qanda müvafiq virus zərərsizləşdirən antikor antikor effektivliyini təyin etmək üçün bir hədəf kimi tanınır və zərərsizləşdirici antikorun daha yüksək konsentrasiyası daha yüksək qorunma effektivliyini göstərir. Lövhə Azaldılması Neytralizasiya Testi (PRNT) neytrallaşdırıcı antikorların aşkarlanması üçün qızıl standart kimi tanınır. Bununla belə, aşağı ötürmə qabiliyyətinə və əməliyyat üçün daha yüksək tələblərə görə PRNT geniş miqyaslı serodiaqnoz və peyvəndin qiymətləndirilməsi üçün praktiki deyil. SARS-CoV-2 Neytrallaşdırıcı Anticisim Aşkarlama Dəsti, qan nümunəsində neytrallaşdırıcı anticismi aşkarlaya bilən, həmçinin bu tip antikorun konsentrasiya səviyyələrinə xüsusi olaraq daxil ola bilən Rəqabətli Fermentlə Bağlı İmmunosorbent Təhlil (ELISA) metodologiyasına əsaslanır.
【Test Proseduru】
1. Ayrı-ayrı borularda hazırlanmış hACE2-HRP məhlulunun 120 μL alikvotu.
2.Hər bir boruya 6 μL kalibrator, naməlum nümunələr, keyfiyyət nəzarəti əlavə edin və yaxşı qarışdırın.
3. 2-ci addımda hazırlanmış hər qarışığın 100 μL-ni əvvəlcədən hazırlanmış sınaq konfiqurasiyasına uyğun olaraq müvafiq mikroplitə quyularına köçürün.
3. Plitəni Plate Sealer ilə örtün və 37°C-də 60 dəqiqə inkubasiya edin.
4. Plitə möhürləyicisini çıxarın və boşqabı hər quyuya təxminən 300 μL 1× Yuma Məhlulu ilə dörd dəfə yuyun.
5. Yuma addımlarından sonra quyularda qalıq mayeni çıxarmaq üçün boşqabın üzərinə kağız dəsmalla vurun.
6.Hər quyuya 100 μL TMB Məhlulu əlavə edin və boşqabı qaranlıqda 20 – 25°C temperaturda 20 dəqiqə inkubasiya edin.
7.Reaksiyanı dayandırmaq üçün hər quyuya 50 μL Stop Solution əlavə edin.
8. Mikroplitə oxuyucusunda 10 dəqiqə ərzində 450 nm-də absorbans göstəricisini oxuyun (daha yüksək dəqiqlik performansı üçün aksesuar kimi 630 nm tövsiyə olunur.
