مجموعة أدوات الكشف عن الأجسام المضادة المعادلة لـ SARS-CoV-2 (ELISA)
【الاستخدام المقصود】
مجموعة اكتشاف الأجسام المضادة المحايدة لـ SARS-CoV-2 عبارة عن مقايسة مناعية تنافسية مرتبطة بالإنزيم (ELISA) مخصصة للكشف النوعي وشبه الكمي للأجسام المضادة المعادلة لـ SARS-CoV-2 في مصل الدم البشري والبلازما. يمكن استخدام مجموعة الكشف عن الأجسام المضادة المعادلة لـ SARS-CoV-2 كوسيلة مساعدة في تحديد الأفراد الذين لديهم استجابة مناعية تكيفية لـ SARS-CoV-2، مما يشير إلى الإصابة الأخيرة أو السابقة. لا ينبغي استخدام مجموعة الكشف عن الأجسام المضادة المحايدة لـ SARS-CoV-2 لتشخيص العدوى الحادة بـ SARS-CoV-2.
【مقدمة】
عادةً ما تحفز عدوى فيروس كورونا استجابات الأجسام المضادة المعادلة. تبلغ معدلات الانقلاب المصلي لدى مرضى كوفيد-19 50% و100% في اليومين السابع والرابع عشر بعد ظهور الأعراض، على التوالي. لتقديم المعرفة، يتم التعرف على الجسم المضاد المعادل للفيروس في الدم كهدف لتحديد فعالية الجسم المضاد ويشير التركيز الأعلى للجسم المضاد المعادل إلى فعالية حماية أعلى. تم الاعتراف باختبار تحييد تقليل البلاك (PRNT) باعتباره المعيار الذهبي للكشف عن الأجسام المضادة المعادلة. ومع ذلك، نظرًا لإنتاجيته المنخفضة ومتطلبات التشغيل العالية، فإن PRNT ليس عمليًا للتشخيص المصلي وتقييم اللقاحات على نطاق واسع. تعتمد مجموعة اكتشاف الأجسام المضادة المعادلة لـ SARS-CoV-2 على منهجية مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم التنافسي (ELISA)، والتي يمكنها اكتشاف الجسم المضاد المعادل في عينة الدم وكذلك الوصول بشكل خاص إلى مستويات تركيز هذا النوع من الأجسام المضادة.
【إجراءات الاختبار】
1. في أنابيب منفصلة، قسمة 120 ميكرولتر من محلول hACE2-HRP المُجهز.
2. أضف 6 ميكرولتر من المعايرات والعينات غير المعروفة وضوابط الجودة في كل أنبوب واخلط جيدًا.
3. قم بنقل 100 ميكرولتر من كل خليط تم إعداده في الخطوة 2 إلى آبار صفيحة ميكروسكوبية مقابلة وفقًا لتكوين الاختبار المصمم مسبقًا.
3. قم بتغطية الطبق بمادة مانعة للتسرب واحتضانه عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 60 دقيقة.
4. قم بإزالة سدادة اللوحة واغسل اللوحة بحوالي 300 ميكرولتر من محلول الغسيل × 1 لكل بئر لمدة أربع مرات.
5. اضغط على اللوحة على منشفة ورقية لإزالة السائل المتبقي في الآبار بعد خطوات الغسيل.
6. أضف 100 ميكرولتر من محلول TMB إلى كل بئر واحضن الطبق في الظلام عند درجة حرارة 20 – 25 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.
7.أضف 50 ميكرولتر من محلول الإيقاف إلى كل بئر لإيقاف التفاعل.
8. اقرأ الامتصاص في قارئ الصفيحة الدقيقة عند 450 نانومتر خلال 10 دقائق (يوصى بـ 630 نانومتر كملحق للحصول على أداء عالي الدقة.
