SARS-CoV-2 ገለልተኛ ፀረ-ሰው ማወቂያ መሣሪያ (ኤልሳ)

【የታሰበ አጠቃቀም】

SARS-CoV-2 ገለልተኛ ፀረ-ሰው ማወቂያ ኪት በሰው ሴረም እና ፕላዝማ ውስጥ ከ SARS-CoV-2 የሚመጡ ፀረ እንግዳ አካላትን በጥራት እና በከፊል ለመለየት የታሰበ ተወዳዳሪ ኢንዛይም-የተገናኘ የበሽታ መከላከያ ምርመራ (ELISA) ነው። SARS-CoV-2 ገለልተኛ የሆነ ፀረ ሰው ማወቂያ መሣሪያ ለ SARS-CoV-2 የሚለምደዉ የበሽታ መቋቋም ምላሽ ያላቸውን ግለሰቦች ለመለየት እንደ እርዳታ ሊያገለግል ይችላል፣ ይህም የቅርብ ጊዜ ወይም ቀደምት ኢንፌክሽንን ያሳያል። SARS-CoV-2 ገለልተኛ የሆነ ፀረ ሰው ማወቂያ መሣሪያ አጣዳፊ SARS-CoV-2 ኢንፌክሽንን ለመመርመር ጥቅም ላይ መዋል የለበትም።

【መግቢያ】

የኮሮናቫይረስ ኢንፌክሽኖች ብዙውን ጊዜ ፀረ እንግዳ አካላት ምላሽ ይሰጣሉ። በኮቪድ-19 ታማሚዎች ውስጥ ያለው የሴሮ ልወጣ መጠን በ7 እና 14ኛው ቀን ምልክቱ ከጀመረ በኋላ 50% እና 100% ነው። ዕውቀትን ለማቅረብ፣ በደም ውስጥ የሚገኘውን ፀረ እንግዳ አካልን የሚገድል ቫይረስ ፀረ እንግዳ አካላትን ውጤታማነት እና ከፍተኛ መጠን ያለው የገለልተኛ ፀረ እንግዳ አካላት ትኩረት ከፍተኛ የመከላከያ ውጤታማነትን ያሳያል። የፕላክ ቅነሳ ገለልተኝነቶች ሙከራ (PRNT) ፀረ እንግዳ አካላትን ለይቶ ለማወቅ እንደ ወርቅ ደረጃ እውቅና ተሰጥቶታል። ነገር ግን፣ በዝቅተኛው የውጤት መጠን እና ከፍተኛ የክወና ፍላጎት ምክንያት፣ PRNT ለትልቅ ሴሮዲያግኖሲስ እና የክትባት ግምገማ ተግባራዊ አይደለም። የ SARS-CoV-2 ገለልተኛ ፀረ-ሰው ማወቂያ መሣሪያ በተወዳዳሪ ኢንዛይም-የተገናኘ ኢሚውኖሰርበንት አሳይ (ELISA) ዘዴ ላይ የተመሠረተ ነው፣ ይህም በደም ናሙና ውስጥ ያለውን ገለልተኝት ፀረ እንግዳ አካላትን ለይቶ ማወቅ እና የዚህ ዓይነቱ ፀረ እንግዳ አካላት ትኩረትን ደረጃ መድረስ ይችላል።

 【የሙከራ ሂደት】

1.በተለየ ቱቦዎች ውስጥ, የተዘጋጀው hACE2-HRP መፍትሄ aliquot 120μL.

በእያንዳንዱ ቱቦ ውስጥ 6 μL የካሊብሬተሮችን, ያልታወቁ ናሙናዎችን, የጥራት መቆጣጠሪያዎችን ይጨምሩ እና በደንብ ይቀላቀሉ.

3.በቅድመ ዲዛይን በተዘጋጀው የሙከራ ውቅር መሠረት በደረጃ 2 የተዘጋጀውን እያንዳንዱን ድብልቅ 100μL ወደ ተጓዳኝ ማይክሮፕሌት ጉድጓዶች ያስተላልፉ።

3. ሳህኑን በፕላት ማሸጊያው ይሸፍኑ እና በ 37 ° ሴ ለ 60 ደቂቃዎች ያፍሱ.

4. የፕሌት ማተሚያውን ያስወግዱ እና ሳህኑን በግምት 300 μL 1 × Wash Solution በአንድ ጉድጓድ ለአራት ጊዜ ያጠቡ.

5. ከታጠበ ደረጃዎች በኋላ በውሃ ጉድጓዶች ውስጥ ያለውን ቀሪ ፈሳሽ ለማስወገድ ሳህኑን በወረቀት ፎጣ መታ ያድርጉ።

6. 100 μL የቲኤምቢ መፍትሄን በእያንዳንዱ ጉድጓድ ውስጥ ይጨምሩ እና ሳህኑን በጨለማ በ 20 - 25 ° ሴ ለ 20 ደቂቃዎች ያፍሱ.

7.ምላሹን ለማቆም 50 μL Stop Solution በእያንዳንዱ ጉድጓድ ላይ ይጨምሩ።

8.በ 450 nm በማይክሮፕሌት አንባቢ በ10 ደቂቃ ውስጥ አንብብ (630nm ለከፍተኛ ትክክለኝነት አፈጻጸም መለዋወጫ ይመከራል።