SARS-CoV-2 neutraliserende teenliggaam-opsporingstel (ELISA)
【BEOOGDE GEBRUIK】
SARS-CoV-2-neutraliserende teenliggaampopsporingstel is 'n mededingende ensiem-gekoppelde immunosorberende toets (ELISA) wat bedoel is vir kwalitatiewe en semi-kwantitatiewe opsporing van totale neutraliserende teenliggaampies teen SARS-CoV-2 in menslike serum en plasma. Die SARS-CoV-2-neutraliserende teenliggaamopsporingstel kan gebruik word as 'n hulpmiddel om individue met 'n aanpasbare immuunrespons op SARS-CoV-2 te identifiseer, wat onlangse of vorige infeksie aandui. Die SARS-CoV-2-neutraliserende teenliggaamopsporingstel moet nie gebruik word om akute SARS-CoV-2-infeksie te diagnoseer nie.
【INLEIDING】
Coronavirus-infeksies veroorsaak gewoonlik neutraliserende teenliggaampeaksies. Die sero-omskakelingskoerse by COVID-19-pasiënte is onderskeidelik 50% en 100% op dag 7 en 14 na simptoomaanvang. Om kennis te bied, word ooreenstemmende virusneutraliserende teenliggaampies in bloed erken as 'n teiken vir die bepaling van teenliggaamdoeltreffendheid en hoër konsentrasie van die neutraliserende teenliggaampie dui op hoër beskermingsdoeltreffendheid. Plaakvermindering-neutralisasietoets (PRNT) word erken as die goue standaard vir die opsporing van neutraliserende teenliggaampies. As gevolg van sy lae deurset en hoër vereiste vir werking, is PRNT egter nie prakties vir grootskaalse serodiagnose en entstof-evaluering nie. Die SARS-CoV-2-neutraliserende teenliggaamopsporingstel is gebaseer op mededingende ensiem-gekoppelde immunosorbenttoets (ELISA) metodologie, wat die neutraliserende teenliggaampie in bloedmonster kan opspoor en spesiaal toegang tot die konsentrasievlakke van hierdie tipe teenliggaam kan kry.
【Toetsprosedure】
1. In aparte buise, neem 120μL van die voorbereide hACE2-HRP-oplossing in 'n portie.
2.Voeg 6 μL kalibreerders, onbekende monsters, kwaliteitkontroles in elke buis by en meng goed.
3. Dra 100μL van elke mengsel wat in stap 2 voorberei is oor na ooreenstemmende mikroplaatputte volgens vooraf ontwerpte toetskonfigurasie.
3. Bedek die plaat met Plate Sealer en inkubeer by 37°C vir 60 minute.
4.Verwyder die Plaatverseëlaar en was die plaat met ongeveer 300 μL 1× Wasoplossing per put vir vier keer.
5.Tik die plaat op papierhanddoek om oorblywende vloeistof in die putte te verwyder na wasstappe.
6. Voeg 100 μL TMB-oplossing by elke put en inkubeer die plaat in donker by 20 – 25°C vir 20 minute.
7. Voeg 50 μL stopoplossing by elke put om die reaksie te stop.
8. Lees die absorpsie in mikroplaatleser by 450 nm binne 10 minute (630 nm as bykomstigheid word aanbeveel vir hoër presisie werkverrigting.
